⚙️ Набор 4: Редактирование синтетической ДНК (продолжение Набора 3)

Уровень: Продвинутый (магистранты, аспиранты, исследователи)

Цель: Научить студентов находить и исправлять ошибки в синтезированных генах — распространённую проблему при заказе ДНК у коммерческих поставщиков. Это критически важно для создания функциональных генетических конструкций.

Основные этапы и методы:

1. Секвенирование синтезированного гена

   1. Выявление несоответствий (делеций, инсерций, замен нуклеотидов).
2. Планирование коррекции

   1. Выбор метода редактирования в зависимости от типа ошибки и её локализации.
3. Асимметричная ПЦР

   1. Используется для внесения точечных изменений с помощью одного длинного и одного короткого праймера.
   2. Получение одноцепочечной ДНК с нужной мутацией, которая затем служит матрицей для восстановления двойной спирали.
4. Overlap-ПЦР (сплайсинг по перекрытию)

   1. Два или более ПЦР-фрагмента с перекрывающимися концами амплифицируются отдельно, затем «сшиваются» в одну молекулу без лигазы.
   2. Позволяет вносить множественные изменения или заменять целые участки.
5. Клонирование отредактированного гена и верификация

   1. Повторное секвенирование для подтверждения точности коррекции.

Приобретаемые навыки:

• Анализ последовательностей ДНК
• Продвинутые методы ПЦР-редактирования
• Планирование генетических конструкций
• Решение проблем, возникающих при работе с синтетической биологией

Научная и образовательная ценность:

Этот набор развивает инженерное мышление в молекулярной биологии. Он особенно актуален в эпоху синтетической биологии, где точность последовательности ДНК — залог успеха эксперимента. Студенты учатся не просто использовать готовые инструменты, а «чинить» и улучшать их на молекулярном уровне.